Гистологическое исследование

Гистологическое исследование – это ключевой метод морфологической диагностики, позволяющий оценить микроскопическое строение тканей и выявить признаки патологических процессов. Благодаря этой методике можно не только установить точный диагноз, но и определить характер, степень дифференцировки и распространённость заболевания. Особенно важную роль гистология играет в онкологической практике, где она становится решающим инструментом для подтверждения злокачественного процесса и верификации опухоли.

Что такое гистология в онкологии? Это система морфологического анализа биоматериала, позволяющая с высокой точностью выявлять опухолевые клетки, определять их тип и агрессивность. Только после подтверждения диагноза гистологическим исследованием может быть обоснованно начато лечение, включая хирургическое вмешательство, химио- и радиотерапию. Поэтому в клинической онкологии гистология, это в буквальном смысле, основа принятия терапевтических решений.

В этом контексте становится актуальным вопрос: чем отличаются биопсия и гистология в онкологии? Биопсия – это процедура получения материала, тогда как гистология – это процесс его лабораторного анализа.

Интеллектуальная собственность https://www.euroonco.ru

Как получают материал для гистологического исследования?

Для проведения полноценного морфологического анализа необходимо предварительно получить биологический материал (фрагмент ткани). Процедура извлечения этого материала называется биопсией. Именно с неё начинается путь к постановке диагноза, особенно если речь идёт о подозрении на злокачественный процесс. Говоря о гистологии, важно понимать, что её достоверность напрямую зависит от качества и объёма взятого образца.

Существует несколько методов биопсии, каждый из которых имеет свои показания и особенности. Выбор метода определяется локализацией образования, предполагаемой природой патологического процесса, техническим оснащением учреждения и общим состоянием организма.

Основные виды биопсии:

• Кор-биопсия – проводится с использованием специальной полой иглы и биопсийного пистолета. Позволяет извлечь цилиндрический столбик ткани, сохраняющий первичную архитектонику клеточного состава. Метод широко применяется при опухолях молочной железы, мягких тканей, лимфатических узлов.
• Аспирационная биопсия – используется для забора жидкого содержимого кист, плевральных, брюшных или других полостей. Материал набирается через тонкую иглу с помощью вакуума, создаваемого шприцем. Хотя такая биопсия чаще применяется для цитологических исследований, при наличии сгустков или тканевых элементов может быть использована и в гистологии.
• Тонкоигольная аспирационная биопсия – разновидность предыдущего метода, выполняемая особо тонкой иглой с фестончатым или заострённым краем. При правильной технике возможно получение как жидкостного, так и фрагментарного тканевого материала.
• Аспирационно-режущая биопсия – комбинированный метод, позволяющий одновременно получить тканевые структуры и отдельные клетки. Применяется, когда требуется максимальная информативность в условиях ограниченного доступа.
• Трепан-биопсия – проводится с использованием трепана – полой трубки с режущим краем. Метод позволяет извлекать плотные и твёрдые ткани, в том числе костные. Это один из немногих методов, пригодных для оценки опухолей костей, костного мозга, также она иногда используется и в дерматологии.
• Эксцизионная биопсия – наиболее радикальный способ, при котором патологическое образование удаляется полностью. Наиболее яркий пример – иссечение увеличенного лимфатического узла при подозрении на лимфопролиферативное заболевание. Этот вид биопсии особенно актуален при хирургическом лечении, когда гистология после операции по удалению опухоли позволяет окончательно верифицировать диагноз и оценить распространённость процесса.
• Скарификационная биопсия – предполагает срезание поверхностного слоя ткани, чаще всего кожи или слизистой. Метод применяется при подозрении на поверхностные новообразования, дерматозы, воспалительные изменения.
• Щипковая биопсия – осуществляется биопсийными щипцами, обычно во время эндоскопических процедур. Широко применяется в гастроэнтерологии, урологии и гинекологии. Позволяет прицельно взять участок слизистой желудка, кишечника или шейки матки.
• Браш-биопсия – выполняется специальной щёткой, которой соскабливают клетки со слизистой, например, с внутренней поверхности бронха. Метод малотравматичен и пригоден для цитологических и, в некоторых случаях, гистологических исследований.
• Петлевая биопсия – применяется в гинекологии и оториноларингологии. Выполняется с помощью электропетли которая почти как скальпель, срезая, позволяет получить фрагмент ткани для анализа.
• Метод отпечатка – заключается в нанесении отделяемого с поверхности эрозий, язв или инфицированных очагов непосредственно на предметное стекло. Применяется преимущественно для цитологической оценки.
• Мазок-отпечаток – включает забор клеточного материала шпателем, скальпелем или щёточкой и перенос его на стекло. Является неинвазивным методом первичной диагностики, входит в состав скрининговых программ (например, при обследовании на рак шейки матки).

Как выполняется биопсия?

Биопсия – это ключевой этап, обеспечивающий получение материала для гистологического исследования. В большинстве случаев она проводится в условиях амбулаторного приёма или малой операционной, под местной анестезией. При расположении очага в труднодоступной зоне или вблизи крупных сосудов дополнительно используются методы навигации: ультразвуковое, рентгенологическое, КТ- или МРТ-наведение.

Процесс выполнения биопсии зависит от её вида, но общие этапы включают:

1. Оценку локализации и доступности очага. При необходимости назначаются визуализирующие методы.
2. Выбор метода и инструментария: игла, щипцы, трепан, скальпель и др.
3. Обезболивание – местное или общее, в зависимости от предполагаемой травматичности вмешательства.
4. Забор ткани – осуществляется в один или несколько заборов.
5. Обработка места вмешательства – компресс, стерильная повязка, иногда холод для профилактики образования гематом.

При выполнении аспирационной биопсии иглу вводят в очаг и создают отрицательное давление при помощи шприца, одновременно перемещая инструмент, чтобы получить достаточное количество материала. В случае кор-биопсии используется полуавтоматическая или автоматическая игольчатая система: специальный механизм быстро «выстреливает» иглу с канюлей внутрь образования, где фиксируется столбик ткани, пригодный для гистологического исследования.

В клинической практике нередко применяется забор материала во время эндоскопических процедур: эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС), бронхоскопии, кольпоскопии, цистоскопии. При этом врач под визуальным контролем щипцами берёт участок слизистой оболочки. Такая биопсия, как правило, малоинвазивна, выполняется быстро, не требует анестезии, либо проводится на фоне местной анестезии.

Особое значение имеет биопсия, выполняемая во время оперативного вмешательства. В ряде случаев операция назначается именно с целью получения образца для верификации диагноза. Классический пример – гистология после операции по удалению опухоли, когда материал направляется в лабораторию для оценки радикальности вмешательства, распространённости процесса и молекулярных характеристик новообразования. Биопсия может занять от нескольких минут до получаса, в зависимости от сложности доступа и объёма вмешательства.

Виды гистологического исследования

После получения биоматериала с помощью биопсии или в ходе операции, он направляется в лабораторию для морфологической оценки. Основной метод анализа – традиционное гистологическое исследование, при котором ткани обрабатываются, фиксируются, окрашиваются и изучаются под микроскопом. Этот этап критически важен, особенно если гистология проводится после операции по удалению опухоли, поскольку она позволяет оценить радикальность вмешательства и степень распространённости патологического процесса.

Стандартная гистология

Процесс включает несколько последовательных этапов:

1. Фиксация ткани – биоматериал помещается в формалин для предотвращения разрушения клеток.
2. Обезвоживание – из ткани удаляется вода путём последовательной обработки спиртами возрастающей концентрации.
3. Парафинирование – ткань пропитывается парафином и формируется в блок, сохраняющий структуру образца.
4. Микротомия – из парафинового блока изготавливаются срезы толщиной 2–4 микрометра.
5. Окрашивание – применяется метод гематоксилина и эозина или иные красители для визуализации внутриклеточных и внеклеточных структур.
6. Микроскопия – патоморфолог оценивает образец, формируя описание и заключение.

При плановом исследовании, анализ как правило занимает 3-7 рабочих дней. Однако при необходимости экспресс-биопсии, например, во время хирургического вмешательства, может быть выполнено на замороженном срезе. Этот метод позволяет ориентировочно оценить структуру тканей в течение 20-30 минут, но обладает меньшей точностью и требует последующего планового подтверждения.

Иммуногистохимическое исследование (ИГХ)

Этот метод применяется, когда необходимо уточнить молекулярный профиль опухоли или её чувствительность к терапии. На срезы тканей наносятся специфические антитела, которые соединяются с определенными рецепторами (при их наличии) на поверхности патологических клеток. ИГХ используется, в частности, при метастазах с неустановленным первичным очагом, для определения рецепторов к эстрогену и прогестерону при раке молочной железы, или экспрессии рецепторов Her2/neu. Таким образом, ИГХ является не только диагностическим методом, но и позволяет максимально персонализировать лечение.

Цитологическое исследование

Цитология – отдельный метод, в основе которого лежит изучение не тканей, а отдельных клеток. Получение материала происходит при помощи мазков, отпечатков или аспирации жидкости. Цитология применяется, когда невозможно получить полноценный фрагмент ткани, например:

• при плевральном или асцитическом выпоте;
• при смывах с брюшины, бронхов, матки;
• в рамках скрининга (мазок Папаниколау с шейки матки).

Хотя точность метода ниже, чем у традиционной гистологии, он обладает высокой чувствительностью к выявлению атипичных клеток и может быть первым шагом в диагностике.

Дополнительные исследования

Современная гистология в онкологии может дополняться:

• In situ гибридизацией (ISH, FISH) – для оценки мутаций и генетических перестроек;
• молекулярно-генетическим анализом – для определения мутаций (EGFR, KRAS и др.);
• патоморфометрией – количественная оценка пролиферативной активности и митозов.

Показания для проведения гистологического исследования

Гистологическое исследование является основным методом подтверждения диагноза при подозрении на злокачественное новообразование и применяется также в ряде других клинических ситуаций, когда требуется определить морфологическую структуру тканей.

Основные показания:

1. Подозрение на онкологическое заболевание. Наиболее частое показания для назначения процедуры. При выявлении узлового образования, инфильтрата, изменения структуры тканей на УЗИ, КТ или МРТ возникает необходимость морфологической верификации диагноза. Только наличие опухолевых клеток в биоптате даёт врачу право установить диагноз рак.

2. Уточнение диагноза при установленной опухоли. В случае подтверждённого новообразования гистологическое исследование проводится для:

   • оценки дифференцировки опухоли;
   • определения степени инвазии и вовлечённости окружающих тканей;
   • оценки краёв резекции после хирургического вмешательства (гистология после операции по удалению опухоли);
   • верификации рецидива или метастазирования.
3. Оценка эффективности лечения. При неоадъювантной терапии (например, при раке молочной железы) гистология после операции позволяет судить об ответе опухоли на химиотерапию или лучевое воздействие. Отсутствие жизнеспособных клеток может свидетельствовать о полной ремиссии, тогда как наличие остаточной опухоли требует корректировки дальнейшего лечения.
4. Выявление и оценка предопухолевых состояний. Морфологическая верификация необходима при наличии изменений, имеющих риск озлокачествления – дисплазий, гиперплазий, полипов, лейкоплакий. Удалённые участки в обязательном порядке направляются на гистологическое исследование, даже если клинически они выглядят доброкачественно.
5. Диагностика хронических воспалительных и аутоиммунных процессов. В гастроэнтерологии, ревматологии, гепатологии и дерматологии гистология применяется для оценки выраженности воспаления, фиброза, атрофии и других структурных изменений. Это позволяет уточнить диагноз, оценить стадию заболевания и отслеживать эффективность терапии.
6. Скрининг на онкологические заболевания. Мазок-отпечаток с шейки матки, направленный на цитологическое исследование, используется в рамках скрининга предрака и рака шейки матки.

Противопоказания и ограничения

Абсолютных противопоказаний к биопсии и гистологическому исследованию как таковых нет. Однако выполнение процедуры может быть отложено при наличии следующих факторов:

• нарушение свёртываемости крови;
• декомпенсация хронических заболеваний;
• аллергия на анестетики;
• тяжёлое общее состояние при отсутствии угрозы жизни.

Результат гистологического исследования

Итогом выполнения морфологической диагностики становится письменное заключение, сформированное по результатам анализа биологического материала врачом-патоморфологом. Независимо от того, получен ли образец при биопсии или в ходе хирургического вмешательства, расшифровка гистологии имеет исключительно важное клиническое значение. От неё зависит постановка окончательного диагноза, оценка прогноза и выбор индивидуального плана лечения.

Как оформляется результат?

Заключение может носить как лаконичный, так и развёрнутый характер – в зависимости от клинической задачи и сложности случая. Например:

• при доброкачественном образовании может быть указано: фиброаденома, признаки малигнизации отсутствуют;
• при злокачественном процессе: инвазивная протоковая карцинома, G2, с лимфоваскулярной инвазией.

Кроме самого диагноза, в протокол гистологического исследования могут быть включены описания:

• клеточной атипии;
• структуры опухолевой и окружающей ткани;
• наличия воспаления, некроза, микрокальцинатов;
• состояния краёв резекции;
• количество митозов и уровня пролиферативной активности;
• инвазии в сосуды, нервы, лимфатические капилляры.

Сколько ждать результат гистологии? В стандартной ситуации – от 3 до 7 рабочих дней. Это обусловлено техническими этапами обработки ткани: фиксация, обезвоживание, парафинирование, срезы, окраска, микроскопия.

Важно отметить: даже если материал был взят в другом учреждении, его можно предоставить в клинику повторно. Для этого потребуется запросить парафиновые блоки и готовые стёкла. Это позволяет провести независимую и при необходимости, более детальное исследование, включая повторное окрашивание и применение дополнительных методик (иммуногистохимия, FISH, молекулярные исследования).

Гистологическое заключение должно трактоваться лечащим врачом, исходя из клинического контекста. Морфологический диагноз, полученный в результате исследования, не рассматривается изолированно. Он обязательно сопоставляется с жалобами, анамнезом, данными осмотров, лабораторных и инструментальных обследований.

В медицинских центрах Евроонко проводится весь комплекс процедур: от получения биоматериала до его экспертного морфологического анализа. Если требуется точный диагноз, верификация уже проведённой гистологии после операции, второе мнение или подбор персонализированной терапии – в Евроонко готовы предложить помощь. Наши врачи обладают многолетним опытом работы в онкологической практике и располагают современным лабораторным оборудованием, соответствующим международным стандартам. Это позволяет принимать клинически обоснованные решения даже в самых сложных случаях.

Список литературы:

1. Kumar V, Abbas AK, Aster JC. Robbins and Cotran Pathologic Basis of Disease. 10th ed. Philadelphia: Elsevier; 2020.
2. Bancroft JD, Gamble M, editors. Theory and Practice of Histological Techniques. 8th ed. London: Churchill Livingstone; 2018.
3. Kiernan JA. Histological and Histochemical Methods: Theory and Practice. 5th ed. Bloxham: Scion; 2015.
4. Suvarna SK, Layton C, Bancroft JD. Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. Edinburgh: Churchill Livingstone; 2013.
5. Carson FL, Hladik III WB. Histotechnology: A Self-Instructional Text. 4th ed. Chicago: ASCP Press; 2014.
6. Puchtler H, Meloan SN. On the chemistry of connective tissue staining. Arch Histol Jpn. 1978;41(3):117–120.
7. Taylor CR, Levenson RM. Quantification of immunohistochemistry—issues concerning methods, utility and semiquantitative assessment II // Histopathology. 2006;49(4):411–424. DOI: 10.1111/j.1365-2559.2006.02538.x.
8. Ramos-Vara JA. Technical aspects of immunohistochemistry // Vet Pathol. 2005;42(4):405–426. DOI: 10.1354/vp.42-4-405.
9. Eble JN, Sauter G, Epstein JI, Sesterhenn IA, editors. Pathology and Genetics of Tumours of the Urinary System and Male Genital Organs. Lyon: IARC Press; 2004.